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本制品是百奥莱博公司推出的专门用于定量检测血清、血浆、组织等样品中的腺苷脱氨酶活性的试剂盒。

待测样品中的ADA催化腺嘌呤核苷水解脱氨，产生次黄嘌呤核苷和铵离子，利用波氏显色法测定氨离子生成量，其反应公式为：腺苷+H2O→次黄嘌呤+NH3，通过分光光度法(酶标仪)测定640nm处吸光度，根据计算公式可得ADA活力，100T试剂盒可测50～55个样品。

腺苷脱氨酶(Adenosine Deaminase，ADA)是嘌呤核苷代谢中重要的酶类，属于一种巯基酶，每分子至少含2个活性巯基，ADA能催化腺嘌呤核苷转变为次黄嘌呤核苷，再经核苷磷酸化酶作用生成次黄嘌呤，其代谢缓和终产物为尿酸，广泛分布于人体各组织中，以胸腺、脾和其他淋巴组织中含量最高，而肝、肺、肾和骨胳肌等含量低。

• 稀释样品和研磨样品所用水，均应为ddH2O，不可为普通的水。
  
• 如果采用国际单位，需在测得活力单位基础上乘以1.19。
  
• 如果没有酶标仪，也可用分光光度计测定，但应注意加入试剂量不同，相应的检测次数会大大减少。
  
• 该试剂盒测定下限在2～5μg/mL之间；从肉眼观察，一般情况下浓度在15～30μg/mL即可显淡蓝色；浓度≥30μg/mL可显蓝色。
  
• 胸水标本经离心后取上清，置于4℃保存备用，ADA活性可稳定1周。
  
• 血清样本应避免溶血，4℃保存3天。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
  
• 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。

• 准备样品：
  
  • 血浆、血清样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于该试剂盒的测定，-20℃冻存，用于ADA的测定。
    
  • 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，-20℃冻存，用于ADA的测定。
    
  • 高活性样品：如果样品中含有较高活性的ADA，可以使用ddH2O稀释。
    
  • (选做)样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的ADA含量。
• 稀释标准品：用ddH2O准确稀释氨氮标准(1mg/mL)至25μg/mL，即为氨氮标准工作液(25μg/mL)，4℃保存备用。
  
• ADA加样：按照下表设置空白孔、标准孔、对照孔、测定孔，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。
  

  加入物(μL)	空白孔	标准孔	对照孔	测定孔
  ddH2O	1	—	—	—
  氨氮标准工作液(25μg/mL)	—	1	—	—
  待测样品(如血清等)	—	—	1	1
  底物缓冲液	12.5	12.5	—	12.5
  混匀，对照孔和测定孔37℃准确水浴
  底物缓冲液	—	—	12.5	—
  波氏ADA显色液	125
  ADA Assay Buffer	125
  混匀，37℃水浴显色

• ADA测定：以ddH2O调零，酶标仪640nm处测定吸光度(分别为A _空白、A _标准、A _对照、A _测定)。